產品中心
PRODUCT CENTER
固定化TCEP二硫鍵還原磁珠
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貨號 |
產品名稱 |
產品規格 |
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BH101 |
BcMag ? 固定化TCEP二硫化物還原試劑盒 |
100mg |
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BH102 |
BcMag ? 固定化TCEP二硫化物還原試劑盒 |
500mg |
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規格 |
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組成 |
表面連接有TCEP基團的磁珠。 |
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磁化強度 |
~40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁 |
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有效密度 |
2.0克/毫升 |
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儲存狀態 |
凍干粉 |
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有效濃度 |
TCEP濃度>12 mM/ml |
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存儲 |
室溫運輸，收到后保存在 4°C . |
TCEP磁珠可有效還原二硫鍵
使用我們的TCEP還原磁珠，可以輕松減少蛋白質和肽中的二硫鍵。我們專門設計的磁珠不再需要耗時的分離程序。
簡介
BcMag ? 固定化TCEP二硫鍵還原試劑盒（TCEP還原磁性基質）使用我們專門設計的磁珠，可有效還原蛋白質，多肽和其它含二硫鍵的分子中的二硫鍵（圖1）。TCEP（[三（2-羧乙基）膦]還原磁性基質避免了耗時的實驗過程，不需要離心柱和分離柱操作，就可將還原樣品與還原劑分離。
固定化TCEP二硫化物還原磁珠，可以實現樣品和還原劑的快速分離回收。TCEP是蛋白質，多肽和其他含二硫鍵的分子中有效的二硫鍵還原劑，對其他官能團相對無反應。三烷基膦TCEP在水溶液中穩定，不會像其他還原劑如二硫蘇糖醇（DTT）和-巰基乙醇（BME）那樣快速氧化。TCEP對常見的巰基反應性化學物質（例如馬來酰亞胺交聯劑）幾乎沒有影響。盡管如此，許多實驗要求被還原樣品與還原劑需要進行分離操作。
磁珠比傳統的色譜法（例如純化柱，瓊脂糖或非磁性樹脂）具有顯著的優勢。基于磁珠的格式可以在短時間內快速高產率處理96個樣品，各種樣品的回收率達到95%以上。而當使用基于色譜柱的技術時，在學術研究實驗室中處理多個樣品時，可能需要大量的手動移液操作。這種實驗方式可能會造成不同人員進行實驗，目標生物分子回收效率的差異。實驗員和學生可能需要廣泛的培訓和實踐才能實現穩定的蛋白質回收率。相比較傳統方法，磁珠具有許多優點，例如它們易于使用，快速的實驗方案，適用性以及高通量自動化和小型化處理的便利性。
特點和優點：
? 回收率高，不含還原劑-----去除還原劑同時，在不損失樣品的情況下回收被還原的分子，是DTT或巰基乙醇（BME）很難實現的。固定化TCEP使您能夠在不進行透析或脫鹽的情況下，以高收率（90%或更高）回收蛋白質/多肽。
? 無任何異味----與DTT或BME不同，固定化TCEP是無味的，可以在普通操作臺上進行還原。
? 穩定性好-----固定化的TCEP穩定性消除了在處理，使用或儲存固定化的TCEP二硫化物還原磁珠時，需要進行防止氧化的特殊措施的需要。
易于使用-----固定化TCEP還原磁珠，在您使用時，可根據需要分配每個實驗所需的用量。可以在不同的pH值（從4到9）和溫度（5到95°C）下進行還原反應。
操作說明
注意事項：
· 還原發生在較寬的pH（pH 4.0-9.0）和溫度范圍（5°-95°C）內。
· 大多數蛋白質可以在不使用變性劑的情況下有效還原。然而，添加變性劑如6M鹽酸胍，將有助于將內部二硫化物暴露出來，與固定的TCEP反應，確保完全還原。不建議使用尿素作為變性劑，因為它會產生與巰基反應的氰酸鹽。
· 在還原過程中，樣品緩沖液中加入5-20 mM EDTA可防止二價離子（例如Zn2+，Cu2+和Mg2+）使巰基再氧化。
· 由于二硫化物會隨著時間的推移而再生，因此還原后的樣品應在還原后立即使用。
· TCEP固定的磁珠僅為一次性使用產品。
以下方案是二硫化物還原的一個例子。為了獲得最佳結果，我們建議進行滴定以優化每次實驗所用的磁珠量。該協議可以按比例放大/縮小。
緩沖液：
? 20Mm EDTA
? dH2O（Milli-Q超純水）
設備
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Item |
Source |
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磁力分離器
**根據樣品體積，用戶可以選擇以下磁力分離器之一 |
l BcMag? separator-2 適用于兩個單獨的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag? separator-6 適用于六個單獨的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag? separator-24 適用于24個單獨的1.5-2.0 ml離心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag? separator-50 適用于1個單獨的50毫升離心管，1個單獨的15毫升離心管, 以及4個 1.5毫升 離心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
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BcMag 96孔磁力分離器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分離器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可調單通道和多通道移液器 |
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操作過程
A. 磁珠制備
1. 用用dH2O懸浮所需用量的磁珠，最終濃度為50 mg/ml。
注意：為了獲得最佳效果，請現配現用磁珠。懸浮的磁珠可以在4oC下保存一周而不會降低活性。
2. 使用前搖動或渦旋試劑瓶，以完全懸浮磁珠。
注意：在分配之前，不要讓磁珠放置超過2分鐘。
B. 樣品制備
1. 將所需量的磁珠轉移到離心管中。
注意：優化每個實驗使用的磁珠數量。通常，對于30-50μl蛋白質/多肽樣品（50-80μg），需使用30-50μl（3mg-5mg磁珠）的TCEP二硫化物還原磁珠。
2. 將試管放在磁力分離器上1-3分鐘，直到上清液變清。在試管保持在磁力分離器上的同時，除去上清液。
3. 加入樣品，并通過緩慢上下移液25次（一分鐘）或通過渦旋混合器以2000 rpm的速度完全混合5分鐘，混勻樣品。
4. 將它們在室溫下，溫和旋轉孵育1小時。
5. 將試管放在磁力分離器上1-3分鐘，直到上清液變清。在試管保持在磁力分離器上的同時，除去上清液。
故障排除
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問題 |
可能的原因 |
建議 |
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樣品還原不良 |
使用的磁珠數量較少 |
使用推薦量的磁珠 |
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孵育時間太短。 |
增加孵化時間 |
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蛋白質中的二硫化物在空間上未能與磁珠表面TCEP接觸。 |
向還原緩沖液中加入6 M鹽酸胍。 |
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孵育時間過長。 |
不要超過2小時的孵化時間 |
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磁珠還原能力降低 |
該產品已保存超過一年。 |
購買新產品 |
參考文獻
1.Zwyssig A, Schneider EM, Zeltner M, Rebmann B, Zlateski V, Grass RN, Stark WJ. Protein Reduction and Dialysis-Free Work-Up through Phosphines Immobilized on a Magnetic Support: TCEP-Functionalized Carbon-Coated Cobalt Nanoparticles. Chemistry. 2017 Jun 27;23(36):8585-8589.
2.Tzanavaras PD, Mitani C, Anthemidis A, Themelis DG. On-line cleavage of disulfide bonds by soluble and immobilized tris-(2-carboxyethyl)phosphine using sequential injection analysis. Talanta. 2012 Jul 15;96:21-5.
3.Han J, Clark C, Han G, Chu TC, Han P. Preparation of 2-nitro-5-thiobenzoic acid using immobilized Tris(2-carboxyethyl)phosphine. Anal Biochem. 1999 Mar 15;268(2):404-7.
4.Han, J.C., et al. A procedure for quantitative determination of tris(2-carboxyethyl)phosphine, an odorless reducing agent more stable and effective than dithiothreitol. Anal Biochem (1994) 220:5-10
