產品中心
PRODUCT CENTER
分泌型His-標簽蛋白純化試劑盒
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貨號 |
產品名稱 |
產品規格 |
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MHP101 |
BcMag? IDA-Ni His-標簽蛋白純化試劑盒 |
5 ml |
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MHP102 |
BcMag? IDA-Ni His-標簽蛋白純化試劑盒 |
10 ml |
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產品屬性 |
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組成 |
表面連接有 Ni2+的磁珠 |
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磁力大小 |
~60 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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穩定性 |
適用于pH 4-11,100%乙醇，100%甲醇，8M尿素，6M鹽酸胍， 20 mM DTT, 20mM EDTA |
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濃度 |
100 mg/ml (1% NiSO4.6H2O or 1% CoCl26H2O) |
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結合能力 |
>2mg His-標簽 GFP /ml 磁珠 |
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儲存 |
儲存在 4°C |
運輸條件: 常溫運輸
儲存條件: 在4oC儲存試劑盒.
簡介
BcMag? 分泌型His標簽蛋白質純化試劑盒是基于磁珠和一種獨特的、專有的負載鎳離子的配體合成的一個試劑盒。磁珠上配體的結合非常牢固，而且對His標簽蛋白質具有極高親和力，即使在含有化學添加劑如螯合劑（EDTA）、強還原劑（DTT）或細胞培養上清液的組分的情況下也不會出現金屬離子浸出現象，盡管，這些化學添加劑具有剝離Ni離子并降低大多數IMAC磁珠作用的功能。His簽蛋白質純化磁珠可以直接從可溶性細胞內蛋白質提取物、HeLa、CHO哺乳動物細胞或Sf9昆蟲細胞培養上清液中有效純化His標簽重組蛋白質。它們可以配合手動與磁性分離器使用，也可以與自動化儀器配合使用。它避免了大量耗時的樣品預處理過程，例如通過透析和濃縮操作進行緩沖液交換。
磁珠產品與傳統色譜法如純化柱、瓊脂糖或非磁性樹脂相比具有顯著優勢。基于磁珠的特性可以在約20分鐘內快速高產率處理96個樣品，重組蛋白可達到85%以上的純度。當使用基于色譜柱的技術實驗時，在科學研究實驗室處理多個樣品時，可能需要大量的手動移液操作。這種移液操作會造成實驗和人之間目標生物分子產量的差異。實驗人員和學生可能需要大量的培訓和實踐才能產生恒定的蛋白質產量。而且磁珠具有許多優點，例如它們易于使用，快速的實驗方案，適用性以及高通量自動化和小型化處理的便利性等。
操作流程
用磁性微粒進行蛋白純化的操作過程非常簡單（圖1）。只需要將磁性微粒與細胞裂解物混合，并連續旋轉培養足夠時間。在混合過程中，保持磁珠懸浮在樣品溶液中，使目標蛋白質與被固定的配體充分結合。孵育后，收集磁珠，并使用磁力分離器將磁珠從樣品中分離。然后，用過含咪唑的洗脫緩沖液洗脫下純化后的His標簽的重組蛋白。
優勢及特點
l 磁珠表現出比多孔載體更少的非特異性結合率。
l 穩定的共價鍵，最少的配體泄漏
l 在含有高達20mM EDTA和20mM還原試劑的情況下，磁珠不會發生鎳離子浸出現象。
l 與細胞培養基中過量表達、或分泌蛋白的純化兼容。
l 極高的蛋白純度
l 性價比高：無需使用純化柱、過濾器、有機試劑或進行重復移液。
l 高通量：與許多不同的自動化液體處理系統兼容。
產品應用
l 研究蛋白質結構和功能
l X射線晶體學的重組蛋白的制備
l 是研究蛋白質，與蛋白質或DNA相互作用的理想選擇材料
l 在免疫研究中，提高抗體與對應蛋白的結合和能力
l 即使使用粗細胞裂解液，也能有效篩選出表達的蛋白質
l GST標簽蛋白的微量純化
背景信息
多聚組氨酸標簽，也稱為6xHis標簽，和His標簽，是從各種表達系統（包括細菌、酵母、植物細胞和哺乳動物細胞系統）中純化重組蛋白的通用工具。該標簽是位于重組蛋白的N或C末端的包含六個或更多個連續組氨酸的殘基。由于這個氨基酸鏈體積非常小，His標簽具有幾個獨特的特性，包括較少的免疫原性、親水性以及可在天然和變性條件下都可發揮作用的用途廣泛性。此外，不需要從重組蛋白上切割標簽，因為它不會干擾其融合蛋白的結構和功能。His標簽的純化原理基于固定化金屬離子親和層析（IMAC）。
固定化金屬離子親和層析（IMAC）是一種快速的親和純化層析技術，是基于攜帶his標簽的重組蛋白質對Ni2+或Co2+的親和力從而達到分離目的，而Ni2+或Co2+則被結合固定到固相基質表面，例如珠狀瓊脂糖或純化柱。在pH 7-8時，His標簽蛋白將與Ni2+或Co2+結合。His標簽重組蛋白質的結合反應受到各種自變量的影響，如pH、溫度、鹽類型、鹽濃度、固定化的金屬和配體密度以及蛋白質大小。可通過降低pH梯度、增加咪唑濃度或在緩沖液中加入EDTA螯合劑來洗脫結合的蛋白質。該技術是快速、直接捕獲和純化帶標簽重組蛋白的，高性價比的理想工具。
盡管IMAC是一種非常有效的蛋白質純化技術，但這種技術主要用于傳統的親和層析基質，如瓊脂糖樹脂或純化柱。使用這些固體基質進行純化過程非常繁瑣、耗時，無法處理體積非常微小的樣品，并且難以適應自動化系統。因此，我們研發出了一種非常有效的磁珠IMAC分離產品來克服這些限制。
相關文獻
1.Carlsson M, Granér T, Algotsson M, Andersson LC, Bj?rner M, Glad G, H?rnsten L, Le Greves P, Lindgren H, Lindqvist S, ?berg K, Hedlund H. New IMAC Media Enabling Purification of Histidine-tagged Proteins Directly From Eukaryotic Cell Culture Supernatants. J Biomol Tech. 2013 May;24(Suppl):S66.
2.Spriestersbach A, Kubicek J, Sch?fer F, Block H, Maertens B. Purification of His-Tagged Proteins. Methods Enzymol. 2015;559:1-15.
3.Zhang C, Fredericks D, Longford D, Campi E, Sawford T, Hearn MT. Changed loading conditions and lysate composition improve the purity of tagged recombinant proteins with tacn-based IMAC adsorbents. Biotechnol J. 2015 Mar;10(3):480-9.
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